Agrologia

LA IMPORTANCIA DEL SUELO

Elaboración de una cromatografía de suelo

Incidir primeramente que un cromatograma ofrece mucha información cualitativa, sobre la calidad del suelo y de sus partes, pero no informa de las cantidades, no es un análisis cuantitativo, por lo que si se desea conocer los nutrientes minerales presentes en el suelo y en qué cantidades se deberá realizar un análisis en laboratorio.

 

Materiales necesarios para elaborar una cromatografía de suelo

 

Utensilios necesarios

  • Cartón o papel
  • Colador de plástico
  • Mortero
  • Báscula, cucharita
  • Vasos (o vasos de precipitados o erlenmeyers, tantos como muestras de suelos)
  • Recipientes de vidrio: para las preparaciones de los reactivos
  • Filtros Whatman, sacabocado 2 mm, clavo, tijeras y lápiz
  • Caja (de porexpan u otro material) oscura, papel de váter
  • Papel de aluminio (para cubrir el recipiente que contenga el nitrato de plata)
  • Placas de Petri (u otros utensilios para misma función)
  • Jeringuilla

Productos y reactivos

 

Paso a paso para elaborar la cromatografía

 

Toma de muestras

Coger una muestra del suelo que se quiera analizar, guardarlo en un recipiente, mejor si no se cierra completamente para que la tierra pueda respirar; se pueden usar bolsas de plástico por ejemplo, a ser posible porosas. Tomar una muestra de medio a 1 kilo. En el caso de tomar una muestra de la capa superficial, desechar los primeros 5 cm de suelo de superficie por elevado riesgo de alteración. Identificar el recipiente de cada muestra.

Se esparce la muestra sobre cartón o papel, que no sea papel de periódico o parecido debido a que las tintas pueden contaminar la muestra. Dejar secar durante 2-3 días al aire (más días si es necesario), al sol de forma indirecta, e ir removiendo la muestra con las manos para obtener un secado homogéneo. En caso de no conseguir secar la muestra de ninguna manera, se puede optar por secarla en una estufa a 60ºC.

 

Muestra de suelo secándose sobre un cartón fino

Muestra de suelo secándose sobre un cartón fino

 

Recomendaciones: Se recomienda trabajar con un mantel a base de papel de periódico por si se vierte algún líquido, y también se recomienda no realizar la cromatografía con una luz justo encima, ya que puede catalizar el revelado.

 

Preparación de la muestra

La muestra de suelo se tamiza con un colador de plástico y se pulveriza con un mortero para obtener una muestra lo más fina posible. Un mortero rugoso puede facilitar el pulverizado. La pulverización de la muestra en mortero debe realizarse girando la mano de mortero e ir machacando la muestra, nunca se debe hacer con la mano de mortero hacia adelante y hacia atrás, puesto que se modifica la muestra. La pulverización se realiza hasta que la tierra quede fina, sin granos. Una vez molida la muestra, se pesan 5 gramos de suelo y se ponen en un Erlenmeyer (o un vaso de precipitados, o un vaso de casa de beber agua).

 

Preparación del reactivo sosa

Por otro lado, para preparar este reactivo necesitamos saber cuántas muestras vamos a analizar. Este reactivo consiste en mezclar el hidróxido de sodio (sosa, NaOH) en de agua destilada (se recomienda agua destilada de calidad, puesto que un agua de baja calidad puede entorpecer los análisis) al 1%. Por ejemplo, para 12 muestras (es decir 12 cromatografias) se pesan 6 gramos de sosa en 600 mL de agua destilada, y así se obtienen 600 mL de sosa al 1%. Estos reactivos se pueden poner en cualquier recipiente de cristal que disponga de suficiente volumen para contenerlos. Disolver la sosa en el agua destilada dando vueltas al recipiente. Este reactivo aguanta bastante tiempo si está bien conservado.

 

Preparación de la muestra + el reactivo sosa

Posteriormente echar 50 mL de sosa al 1% en cada una de las muestras, y mezclar. La mezcla se realiza 7 veces [la mezcla se hace de la siguiente manera: se dan 7 vueltas hacia un lado (hacia la derecha) y 7 hacia el otro lado (hacia la izquierda), y estas 7 vueltas a un lado y al otro se repite 7 veces]. El hecho de girar hacia un lado y hacia el otro es que los giros a izquierda y derecha estructuren molecularmente el agua y facilitar la disolución.

Paso a paso:

  • Momento 0: Se pesan los 5 gramos de suelo tamizado, se añaden 50 mL de NaOH al 1%, se mezcla de la manera explicada anteriormente, y se deja reposar 15 minutos.
  •  Momento 15’: Pasados 15 minutos se vuelve a mezclar de la manera indicada. Y se deja reposar 1 hora.
  •  Momento 1h: Pasada una hora se vuelve a mezclar de la manera indicada, y se deja reposar 5-6 horas.
  • Momento 5h: Pasadas las 5-6 horas no se mezcla más! Es el momento de hacer el revelado. Durante este tiempo de 5 horas, se tienen que preparar los filtros, el nitrato de plata y revelar el nitrato de plata en los filtros. Es decir, que en el momento 5 h tiene que estar todo preparado para impregnar el filtro con la muestra de suelo.

 El resto de suelo se guarda en una bolsa de papel y se pone dentro de un recipiente de vidrio o plástico. Guardar la muestra por lo menos hasta haber terminado la cromatografía y asegurarse que se ha realizado correctamente.

 

Preparación del filtro

Filtro Whatman del número 4

Filtro Whatman del número 4

Hay que preparar tantos filtros como muestras tengamos. Se recomiendan los filtros Whatman, para suelos se suelen usar los del número 4 (o número 1). Se usa este tipo de filtro porque es un papel sensible, así que hay que manipularlo con cuidado y tocarlo lo mínimo posible y con las manos limpias. El Whatman número 4 absorbe más, es más rápido,  que el número 1, que tarda más debido a que es un filtro más apretado.

Se usa un sacabocado de 2 mm para realizar el agujero en el centro del papel filtro, por dónde se pondrá posteriormente el palibo. El agujero se puede realizar con la ayuda de un martillo, sin excederse en el golpe, por lo que se recomienda poner una madera por debajo. Se marca el papel filtro con dos puntos, hechos con la ayuda de un clavo pequeño, a 4 cm y a 6 cm del centro; la marca de 4 cm nos servirá para impregnar con nitrato de plata, y la de 6 cm nos servirá para impregnar el filtro con la muestra de suelo hasta esa marca.

Identificar los filtros según la muestra que se analiza. La zona para identificar las muestras es la parte más externa del filtro, de la marca de los 6 cm hasta el borde. Se recomienda escribir a lápiz.

 

Ejemplo del papel de filtro preparado

Ejemplo del papel de filtro preparado

 

Preparación del palibo

Uno de los filtros se usa para elaborar los palibos. Con un lápiz se dibujan cuadrados de 2×2 cm y se cortan con tijera. A cada uno de estos cuadrados de papel se les da una forma de canuto, haciendo un cilindro que se ubicará en el centro del papel de filtro, por el agujero que se ha hecho anteriormente con el sacabocados. El palibo hace la función de absorber el líquido para que se impregne el filtro.

Se van a usar 2 palibos por cada muestra, uno para impregnar primero el nitrato de plata, y el segundo para impregnar el filtro con la muestra de suelo.

 

Ejemplo de un filtro preparado para obtener los palibos

Ejemplo de un filtro preparado para obtener los palibos

 

Preparación del nitrato de plata

La preparación del nitrato de plata se hace según la cantidad de muestras que se deseen revelar. Para 12 muestras es suficiente si se pesan 0,5 gramos de nitrato de plata (solido) en un recipiente de vidrio y se añaden 100 mL de agua destilada para obtener una dilución del 0,5%. Recordar que el nitrato de plata debe permanecer siempre en oscuridad completa ya que es altamente sensible a la luz (y por este motivo se usa para hacer el revelado), siempre hay que guardarlo envuelto en papel de aluminio y en lugar oscuro! El nitrato de plata solido dura 1-2 años bajo buena conservación, pero al juntarlo con agua destilada y volverlo líquido se oxida rápidamente. Para saber si el nitrato de plata está en mal estado, debido al exceso de luz que oxida el producto (de abrirlo repetidamente para elaborar las cromatografías) debe observarse una presencia aglomerada y con manchas negras (oxidado), como puntitos negros.

Es recomendable hacer la dilución necesaria de nitrato de plata y no guardarlo ya que dura muy poco tiempo en estado líquido (entre una semana y 10 días).

 

Impregnación de los filtros con el nitrato de plata

Una vez preparado el nitrato de plata al 0,5%, poner un poco en una placa de Petri (o un pequeño recipiente de vidrio) e impregnar el filtro a través de un palibo hasta la marca de 4 cm. Cuando llega a esa marca, lo retiramos y sacamos el palibo con unas pinzas (el palibo lo desechamos).

El filtro impregnado de nitrato de plata se pone en una caja que permita total oscuridad (que quede libre de luz), se recomienda una caja de porexpan. Lo ponemos entre un poco de papel de váter hasta que se seque, habitualmente 2 horas, aunque se puede dejar hasta 6 horas. Es importante poner a secar los filtros impregnados con nitrato de plata en la caja, como mínimo, 2 horas antes de que transcurran las 5 horas del momento 5h, para poder revelar la muestra de suelo una vez se haya secado el nitro de plata.

 

Impregnación de la muestra de suelo

Con una jeringuilla se ponen 3-4 mL de muestra, de la parte sobrenadante, en una placa de Petri. Se pone un nuevo palibo en el filtro que hemos sacado de la caja, impregnado de nitrato de plata que ya está seco, y se pone sobre la muestra, unos 20-30 minutos, hasta que la impreganción alcance la marca de los 6 cm. Al impregnarse el filtro, este se puede empezar a doblar por el peso, por lo que se recomienda poner una placa de Petri (o cualquier otro recipiente que ofrezca la misma solución) más grande que mantenga en filtro sin doblarse.

 

Ejemplo de la impregnación de la muestra de suelo en un filtro previamente impregnado de nitrato de plata

Ejemplo de la impregnación de la muestra de suelo en un filtro previamente impregnado de nitrato de plata

 

Cuanto más seco es el clima, más lenta es la impregnación del filtro, debido a que en climas húmedos los líquidos corren más rápido al evaporarse menos.

Una vez la muestra alcanza la marca de 6 cm, se retira el filtro, se saca el palibo con unas pinzas (el palibo se desecha) y primero se deja secar un poco, se cuelga con un trozo de celo en el borde de una mesa, o en algún lugar que no tenga contacto con el filtro aún húmedo. Pasados varios minutos se irá secando y se empezará a revelar.

 

Imagen izq.: Placas de Petri, las pequeñas dentro de las grandes. Imagen dcha.: Impregnación de los filtros con las muestras de suelo, a través del palibo

Imagen izq.: Placas de Petri, las pequeñas dentro de las grandes.
Imagen dcha.: Impregnación de los filtros con las muestras de suelo, a través del palibo

 

 

Revelado

Pasados esos minutos, se puede pegar en el cristal de una ventana, donde la luz solar sea indirecta. La muestra se irá revelando con la luz indirecta durante unos 6-8 días, momento en que la cromatografía estará lista para ser interpretada.

Si se deja la muestra más tiempo, esta seguirá revelándose y los colores irán variando, por lo que podemos entorpecer la lectura. Para poder interpretar de manera tranquila la cromatografía, se recomienda hacer una fotografía individual a cada cromatograma, desde la misma ventana donde se reveló y cuando haya luz indirecta a través. Si se quisieran mantener los colores de manera persistente en el cromatograma, se debería sumergir en parafina.

 

Cromatogramas diversos revelandose a luz indirecta (cara norte)

Cromatogramas diversos revelandose a luz indirecta (cara norte)

 

One comment on “Elaboración de una cromatografía de suelo

  1. Pingback: Elaboración de una cromatografía de granos secos y semillas | Agrologia

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