Agrologia

LA IMPORTANCIA DEL SUELO

Elaboración de una cromatografía de productos vegetales (flores, frutos, tallos, hojas)

La cromatografia de frutas y verduras debe realizarse rápidamente, ya que los productos se deterioran y se oxidan con facilidad. Cuanto más tiempo pase desde la cosecha del producto hasta elaborar la cromatografía, más destacaran los minerales y menos las vitaminas, los carotenos, las enzimas, etc., por lo que se puede entorpecer la lectura del cromatograma.

 

Materiales necesarios para elaborar una cromatografía de productos vegetales

Utensilios necesarios

  • Tijeras ( o mortero)
  • Báscula, cucharita
  • Vasos (o vasos de precipitados o erlenmeyers, tantos como muestras de productos vegetales)
  • Recipientes de vidrio: para las preparaciones de los reactivos
  • Filtros Whatman, sacabocado 2 mm, clavo y lápiz
  • Caja (de porexpan u otro material) oscura, papel de váter
  • Papel de aluminio (para cubrir el recipiente que contenga el nitrato de plata)
  • Placas de Petri (u otros utensilios para misma función)
  • Jeringuilla

 

Productos y reactivos

 

Paso a paso para elaborar la cromatografía de productos vegetales

Preparación del hidróxido de sodio (NaOH o sosa): preparar el hidróxido de sodio al 0,1%, es decir, 0,1 gramos de NaOH solido / 100 mL de agua desionizada o destilada, disolverlo. Debe calcularse la cantidad de sosa al 0,1% que se requiera para elaborar las distintas muestras, para que no sobre demasiada cantidad de la preparación, puesto que se conserva mejor en escamas sólidas.

Preparación de los Erlenmeyers: En la mesa poner papel de periódico por si se vierte algo de líquido. Poner tantos erlenmeyers (o vasos de precipitados, o  vasos de cocina de beber agua) como muestras queramos cromatografiar. Anotar la referencia en cada Erlenmeyer y echar 50 mL de NaOH al 0,1%.

Preparación de las muestras: Se pesan 2,5 gramos de muestra (de pulpa, de hojas, de flores, etc.) y se pica a pedacitos bien pequeños con unas tijeras lavadas previamente con agua destilada. También se puede usar un mortero para machacar la muestra, pero resulta más laborioso. Añadir las muestras bien picadas en los erlenmeyers.

Reposo: Lo ideal sería dejar reposar la muestra durante 4 horas, pero también hay la opción de elaborar la cromatografía de forma inmediata, sin dejar reposar la muestra. En este punto, resulta interesante correr las muestras en los filtros a distintos tiempos, para crear unos patrones estandarizados.

Preparación del filtro: La preparación del filtro se realiza del mismo modo que en la elaboración de cromatografías de suelo. Se hace un agujero en el centro del filtro con un sacabocados de 2 mm, y se marcan unos pequeños agujeritos con un clavo a 4 cm y a 6 cm del centro del filtro. Apuntar con un lápiz los datos de la muestra en el espacio que queda entre la marca de los 6 cm y el borde del papel del filtro, para referenciarlo.

Se recomienda usar el papel de filtro número 1 o 4 (con el nº 4 se puede hacer perfectamente, ya que la clorofila de todas las hojas, frutos, etc., se disuelve en agua). Aun así, hay una excepción con las frutas y verduras muy ricas en grasa, como el aguacate, para el cual se recomienda usar los papeles del filtro número 41.

 

Ejemplo del papel de filtro preparado

Ejemplo del papel de filtro preparado

 

Preparación del palibo: La preparación del palibo se realiza del mismo modo que en la elaboración de cromatografías de suelo. Uno de los filtros se usa para elaborar los palibos. Con un lápiz se dibujan cuadrados de 2×2 cm y se cortan con tijera. A cada uno de estos cuadrados de papel se les da una forma de canuto, haciendo un cilindro que se ubicará en el centro del papel de filtro, por el agujero que se ha hecho anteriormente con el sacabocados. El palibo hace la función de absorber el líquido para que se impregne el filtro.

Se van a usar 2 palibos por cada muestra, uno para impregnar primero el nitrato de plata, y el segundo para impregnar el filtro con la muestra.

 

Ejemplo de un filtro preparado para obtener los palibos

Ejemplo de un filtro preparado para obtener los palibos

 

Preparación del nitrato de plata (AgNO3): Preparar nitrato de plata al 0,5%, es decir 0,5 gramos de nitrato de plata solido / 100 mL de agua desionizada o destilada, y disolverlo. Esta cantidad mencionada puede servir para unas 12 muestras.

Sensibilizar el filtro: Poner un poquito de AgNO3 en una placa de Petri pequeña, e impregnar un filtro a través de un palibo hasta la marca de 4 cm. Recordar que el nitrato de plata debe estar en oscuridad completa, guardarlo siempre envuelto de papel de aluminio! El nitrato de plata en sólido dura 1-2 años, pero en líquido se oxida rápidamente, dura unos 7-10 días.

Posteriormente, sacar el palibo con unas pinzas, y desecharlo. Poner el filtro impregnado de nitrato de plata en una caja cualquiera (a ser posible de porexpan) que cierre bien para tener total oscuridad, y se pone entre papel de váter por debajo y por encima. Se deja el tiempo necesario hasta que se seque el nitrato de plata, que habitualmente son 2 horas, pero se puede dejar hasta 6 horas.

Correr el croma: Una vez la muestra ha hecho el reposo o no, se mezcla de la siguiente manera: Se coge el erlenemeyer o vaso que contiene la muestra y se agita dándole vueltas 7 veces a la derecha y después 7 veces a la izquierda, y se repite 7 veces; haciendo un total de 98 vueltas. Con una jeringuilla se toman unos 4 mL de la muestra sin dejarla reposar, del sobrenadante, y se echa en una placa de Petri pequeña para correr el croma hasta la marca de 6 cm.

Cuando la impregnación llega hasta la marca de 6 cm se levanta la cromatografía, se saca el palibo con unas pinzas (el palibo se desecha). Se cuelga el croma en el borde de una mesa con un trocito de celo (pegado en la zona de la marca de 6 cm hasta el borde, para no manipular el cromatograma), y se deja secar unos minutos. Este empezará a revelarse. Después se cuelga en el cristal de una ventana donde la luz incidente sea luz solar indirecta, luz difusa. El cromatograma se irá revelando con la luz indirecta durante unos 6-8 días.

Si se deja la muestra más tiempo, esta seguirá revelándose y los colores irán variando, por lo que podemos entorpecer la lectura. Para poder interpretar de manera tranquila la cromatografía, se recomienda hacer una fotografía individual a cada cromatograma, desde la misma ventana donde se reveló y cuando haya luz indirecta a través. Si se quisieran mantener los colores de manera persistente en el cromatograma, se debería sumergir en parafina.

 

Cromatografía de un tomate procedente de agricultura convencional

Cromatografía de un tomate procedente de agricultura convencional

 

A modo de resumen, facilito seguidamente un cuadro explicativo extraído del libro Cromatografía: imágenes de vida y destrucción del suelo, de Jairo Restrepo y Seabastiao Pinheiro, sobre la elaboración de una cromatografía de productos vegetales como flores, frutos, hojas y tallos.

Fuente: Cromatografía, imágenes de vida y destrucción del suelo, Jairo Restrepo y Seabastiao Pinheiro

Fuente: Cromatografía, imágenes de vida y destrucción del suelo, Jairo Restrepo y Seabastiao Pinheiro

 

 

One comment on “Elaboración de una cromatografía de productos vegetales (flores, frutos, tallos, hojas)

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This entry was posted on March 23, 2015 by in Cromatografía de alimentos and tagged , , , , , , , , , , .
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